在分子生物学和基因组学研究中，PCR（聚合酶链反应）技术被广泛应用于DNA扩增。然而，在进行大规模的基因扩增或构建文库时，如何高效、准确地设计引物成为了一个关键问题。特别是在需要构建多个重叠片段以形成完整基因序列时，传统的单次PCR方法往往受限于产物长度和复杂性。因此，优化重叠PCR（Overlapping PCR）引物设计策略显得尤为重要。 #### 引言 重叠PCR是一种将多个小片段拼接成完整基因序列的技术，通常用于基因克隆、基因组测序以及基因表达分析等。该方法通过设计一系列特异性引物来扩